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产品介绍
产品特征
转染效率高;细胞毒性低;无需换液,操作简单。
1.细胞铺板
提前一天将细胞种植在6孔板中,以转染时细胞密度30%-70%为宜。
2.siRNA制备(可选)
使用RNase-free ddH20 溶解 siRNA干粉,终浓度为 20 uM。
即使用125 plddH20溶解10D(约 33 g 或2.5 nM) siRNA干粉充分震荡使其溶解
3.转染合体制备
1)准备2个无菌 EP 管,各加入100 pL OPTI-MEM 培养液,
2)第一管加入5pL Neofect,轻柔混合10次。
3)另一管加入5uLsiRNA(20pM)溶液,振荡混匀。4)将 Neofect混合液滴加到 siRNA 合液中,轻柔混,室温静置 30 min,转染复合体制备完成4.细胞转染
4.细胞转染
1)转染:将转染复合体滴加入细胞培养液中,轻摇混匀,转入CO2培养箱中继续培养。
2)换液(可选):若有明显细胞毒性,转染 12-24 h,更换成新鲜的细胞培养液。
3)验证:转染24-48 h,利用qPCR或Western blot 检测目的甚因表达水平
培养器皿 |
20uM siRNA(ul) |
Neofect(ul) |
OPTI-MEM(ul) |
24孔板 |
1(1-3) |
1(1-1.5) |
50(50-100) |
6孔板 |
5(4-12) |
5(4-6) |
100(100-200) |
Φ35mm培养皿 |
5(4-12) |
5(4-6) |
100(100-200) |
Φ60mm培养皿 |
8(6-24) |
8(6-12) |
200(200-400) |
按照Neofect与siRNA(20uM)=1:1的体积混合,不同细胞可适当提高siRNA的用量进行优化。
常温运输,储存于4℃,有效期18个月。